ICAP委员会对此问题进行了广泛的讨论，但迄今尚未达成共识。在许多国家/地区，仅显示细胞胞浆染色的血清被认为是ANA阳性，而在另一部分国家/地区，这种血清被认为是ANA阴性，但胞浆阳性。而有些地区胞浆染色通常又是不报告的，因为它不能严格地定义为核染色。

但是，广泛认为，仅胞浆染色的血清不应被忽略（1），部分学者建议将ANA（抗核抗体）检测重命名为anti-cellular antibodies（抗细胞抗体）检测（1），这与ICAP的IFA模型命名法一致（即AC =anti-cellular）。这种情况如何进行报告目前仍是一个问题。且将其确定为ANA阳性还是阴性对某些疾病分类标准是存在影响的，ICAP也正在努力在未来达成共识建议。

N. Agmon-Levin, J. Damoiseaux, C. Kallenberg, U. Sack, T. Witte, M. Herold, X. Bossuyt, L. Musset, R. Cervera, A. Plaza- Lopez, C. Dias, Sousa M. Jose, A. Radice, C. Eriksson, O. Hultgren, M. Viander, M. Khamashta, S. Regenass, L. E. Coelho Andrade, A. Wiik, A. Tincani, J. Ronnelid, D. B. Bloch, M. J. Fritzler, E. K. Chan, I. Garcia-de la Torre, K. N. Konstantinov, R. Lahita, M. Wilson, O. Vainio, N. Fabien, R. A. Sinico, P. Meroni, and Y. Shoenfeld. International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies. Ann.Rheum.Dis. 73:17-23, 2014.

使用不同制造商的HEp-2细胞载片，HEp-2免疫荧光法(IFA)的染色可能存在明显的差异，在某些细胞基质中可能缺失某些自身抗原和抗原决定簇。为确保所使用的HEp-2载片能够检测出抗SS-A/Ro60抗体和抗SS-B/La抗体的荧光模型，应使用合适的参考材料(如www.AutoAb.org)来验证HEp-2载片和所使用的其他试剂的性能。同时建议采用低滴度阳性对照，以测试每批HEp-2载片的敏感性。如果抗SS-A/Ro60抗体和抗SS-B/La抗体的标准品未呈现细胞核染色，则表明该试剂没有针对这些自身抗原进行优化。特别是SS-A/Ro60自身抗原，比较不稳定，可以用温和的溶剂提取，甚至长时间保存在某些缓冲液中。

抗SS-B/La抗体：通常经固相法(SPA)测定的高滴度抗SS-B/La抗体阳性血清在HEp-2 IFA中亦呈现阳性。但是，单独抗SS-B/La抗体阳性的血清非常罕见，因此任何HEp-2 IFA染色阳性都提示除抗SS-B/La抗体可能与第二抗体（例如抗SS-A/Ro60）有关。

抗Ro60/SS-A抗体：有报道称，固相法测定的抗SS-A/Ro60抗体阳性血清经HEp-2 IFA检测可能为阴性。抗SS-A/Ro60抗体通常会产生核细颗粒荧光模型AC-4，但某些制造商提供的HEp-2载片中，抗SS-A/Ro60抗体可能为阴性。据报道，有制造商提供的表达SS-A/Ro60抗原的HEp-2细胞载片，与传统的HEp-2基质比较具有更高的敏感性和特异性。相比之下，Ro52 (TRIM21)自身抗体在HEp-2 IFA检测中较为罕见。因此，HEp-2 IFA检测单一的抗Ro52 /TRIM21抗体血清可能出现阴性的荧光模型。

如果间接免疫荧光法检测HEp-2细胞(HEp-2 IFA)在1:80时呈阳性，建议将血清滴度稀释到至少1:640，然后报告滴度为：

•>1:80 - <1:640

•= 1:640

•> 1:640

建议将稀释1:640作为最低要求。考虑到检测成本，一些实验室稀释度不超过1:640，另一些实验室使用自动化的ANA IFA技术将经计算获得最终滴度。

 

补充说明:

虽然对某些抗体而言，较高的滴度更能提示自身抗体相关的风湿病(AARD)，但仅用HEp-2 IFA方法判读时仍需注意:

1. ICAP所描述的HEp-2 IFA (ANA)荧光模型并未包括所有模型。例如核致密细颗粒型(AC-2)，已被证明在一般人群中可以出现高滴度抗体(1)，且高尔基体、中心体和其他一些细胞胞浆模型也是如此，但仍需进一步验证。

2. 在某个时间点上ANA本身意义并不大，重要的是要知道滴度随时间的变化是减少、增加还是保持不变。

 

参考文献:

1. Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum. 2011;63:191-200.

首先，有必要对显微镜设置和HEp-2载片进行评估，以确定是否有能力呈现ICAP描述的AC-29模型，AC-29模型的一些评估要素可能不容易识别。虽然分裂间期细胞核以及分裂期细胞染色体的荧光模型非常明显，但核仁组织区(NOR)、核仁和细胞质染色需要辨别。对于NOR染色，需要缓慢上下调节显微镜的微调旋钮来分析不同的视野。血清在低倍稀释时，细胞质染色可能不容易观察到，只有在高倍稀释时才可见。根据HEp-2载片品牌/批号和制造商的不同，核仁的染色可能不完全一致，会存在较大差异。 

使用抗Topo I的参考血清（来自自身抗体标准化委员会（ASC）CAT#: IS2135，ANA #09），五种亚细胞结构域的荧光模型应该能够全部被识别。若不能识别，建议调整显微镜设置、HEp-2载片和/或使用相关试剂来排除异常。

如果五个评估要素均被识别，则为典型的抗Topo I抗体的AC-29模型。如果仅未观察到核仁染色，仍然可以将其归类为AC-29模型。若采用ASC提供的标准血清以及其他抗Topo I的内部质控品，其他四个评估要素中任何一项未被识别，则不能判断为AC-29模型。

 

最后，由于AC-29模型需要在不同对焦视野上进行观察，对于数值孔径较小、景深较浅的自动化IFA显微系统来说，AC-29模型的识别可能存在困难。

NuMA核型对应的靶抗原为NuMA蛋白，又称为NuMA-1蛋白，目前无商品化检测试剂盒。NuMA核型通常我们检测的抗核抗体谱均为阴性，但抗NuMA抗体最常伴随的ENA为SSA。

大约一半的NuMA核型患者具有系统性自身免疫性风湿疾病的临床特征，其中就包括干燥综合征，因此这两例病例出现SSA/SSB阳性，属于正常现象。NuMA核型对应的靶抗原为NuMA蛋白，又称为NuMA-1蛋白，目前无商品化检测试剂盒。NuMA核型通常我们检测的抗核抗体谱均为阴性，但抗NuMA抗体最常伴随的ENA为SSA。

大约一半的NuMA核型患者具有系统性自身免疫性风湿疾病的临床特征，其中就包括干燥综合征，因此这两例病例出现SSA/SSB阳性，属于正常现象。NuMA核型对应的靶抗原为NuMA蛋白，又称为NuMA-1蛋白，目前无商品化检测试剂盒。NuMA核型通常我们检测的抗核抗体谱均为阴性，但抗NuMA抗体最常伴随的ENA为SSA。

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